Ma ke kaʻina hana o ka hoʻopaʻa ʻana i nā moʻo, ʻike pinepine mākou i ka lawa ʻole o nā laʻana RNA, no ka laʻana, no ke aʻo ʻana i nā ʻōpū o ka waha anatomical liʻiliʻi, ʻo ia hoʻi nā ʻāpana hoʻokahi, a me nā laʻana o nā mutation gene kikoʻī i kākau ʻia ma nā pae haʻahaʻa loa i loko o nā pūnaewele kanaka.ʻOiaʻiʻo, no ka hoʻāʻo COVID-19, inā ʻaʻole i kūpono nā swabs a ʻaʻole lawa ka manawa i ka wā o ka laʻana, e haʻahaʻa loa ka nui o ka laʻana, ʻo ia ke kumu i puka mai ai ke Komisina o ke Ola a me ka Hoʻolālā ʻohana i ʻelua lā i hala aku nei. ua hala i ka hoʻāʻo, a inā ʻaʻole i lawe ka mea hoʻohālike nucleic acid i ʻeono mau laʻana, hiki iā ʻoe ke hōʻike.
He mea nui ka naʻau o ka reagent no ka mea ua loaʻa iā mākou kēia pilikia a i ʻole kēlā pilikia, no laila he aha kā mākou e hana ai e hoʻomaikaʻi ai i ka naʻau o RT-PCR?
Ma mua o ke kūkākūkā ʻana i nā hoʻonā hiki, e haʻi kākou i ʻelua mau pilikia nui me ke kūlana a mākou i ʻōlelo ai.
ʻO ka mea mua, hopohopo mākou e pili ana i ka nalo ʻana o RNA inā he liʻiliʻi wale nō nā heluna cell i kā mākou hāpana.Inā hoʻohana ʻia nā ʻano hoʻokaʻawale maʻamau a me ka hoʻomaʻemaʻe ʻana, e like me ke ʻano kolamu a i ʻole ke ʻano o ka wai nucleic acid precipitation, aia ke kūlana kiʻekiʻe e nalowale ana nā mea liʻiliʻi.ʻO kahi hoʻonā ka hoʻohui ʻana i kahi mole kalaiwa, e like me ka tRNA, akā naʻe, ʻaʻohe mea e hōʻoiaʻiʻo i kā mākou hoʻokolohua hoʻōla.
No laila he aha ke ala ʻoi aku ka maikaʻi?ʻO kahi koho maikaʻi no nā cell moʻomeheu a i ʻole microanatomical sample e hoʻohana i ka lysis pololei.
ʻO ka manaʻo e hoʻokaʻawale i nā keena no 5 mau minuke, e hoʻokuʻu i ka RNA i loko o ka hopena, a laila e hoʻōki i ka hopena no 2 mau minuke, a laila e hoʻohui pololei i ka lysate i ka hopena transcription hoʻohuli i ʻole e nalowale ka RNA, a hope e hoʻokomo pololei i ka cDNA hopena. i loko o ka hopena manawa maoli.
Akā, pehea inā, ma muli o ka palena palena a i ʻole ka liʻiliʻi o ka hōʻike ʻana o ka gene, hiki iā mākou ke hana hou i ka RNA āpau a ʻaʻole naʻe e hāʻawi i nā mamana e loaʻa ai kahi hōʻailona manawa maoli?
I kēia hihia, hiki ke hoʻohana nui ʻia ka hana pre-amplification.
He papahana kēia e hoʻonui ai i ka naʻau ma hope o ka hoʻololi ʻana i ka palapala.Ma mua o ka hoʻomaka ʻana, pono mākou e nīnau i lalo i nā pahuhopu a mākou e makemake ai, i mea e hoʻolālā ai i nā primers kikoʻī no kēia mau pahuhopu no ka hoʻonui mua.
Hiki ke hoʻokō ʻia kēia ma ka hana ʻana i kahi primer hui ʻia me ka 100 mau pālua o nā primers a me kahi pōʻai pane o 10 a 14 mau manawa.No laila, pono kahi Master Mix i hoʻolālā ʻia no kēia koi e hoʻonui i ka cDNA i loaʻa.
ʻO ke kumu o ka hoʻonohonoho ʻana i ka helu o nā pōʻai ma waena o 10 a me 14, ʻo ia ka helu palena o nā pōʻai e hōʻoia i ka randomness ma waena o nā pahuhopu like ʻole, he mea koʻikoʻi ia no nā mea noiʻi e pono ai ka ʻike molecular quantitative.
Ma hope o ka hoʻonui mua ʻana, hiki iā mākou ke loaʻa ka nui o ka cDNA, no laila e hoʻomaikaʻi maikaʻi ʻia ka ʻike ʻike ma ke kua hope, a hiki iā mākou ke hoʻoheheʻe i ka hāpana a hana i nā hopena PCR manawa maoli e hoʻopau i nā hewa hewa.
Ka manawa hoʻouna: Apr-11-2023